REAGEN™ Kanamycin ELISA Test Kit là một xét nghiệm miễn dịch enzym cạnh tranh để phân tích định lượng Kanamycin trong thịt / gan / thận, dịch phân giải tế bào, nước tiểu, huyết thanh và sữa.
Thu hồi cao (> 80%), nhanh chóng (10-40 phút) và các phương pháp chiết xuất tiết kiệm chi phí.
Giới hạn phát hiện là 0,2 ng / g.
Khả năng tái tạo cao.
Xét nghiệm ELISA nhanh (dưới 1 giờ bất kể số lượng mẫu).
Phương pháp này dựa trên xét nghiệm ELISA so màu cạnh tranh.Kanamycin-BSA đã được phủ trong các giếng đĩa.Trong quá trình phân tích, mẫu và kháng thể Kanamycin (Kháng thể # 1) và HRP-Liên hợp (HRP-Liên hợp Kháng thể # 2) được thêm vào giếng để ủ.Nếu tồn tại dư lượng Kanamycin trong mẫu, nó sẽ cạnh tranh với Kanamycin trên các giếng đĩa để tìm kháng thể Kanamycin. .Cường độ màu kết quả, sau khi thêm chất nền HRP (TMB), có mối quan hệ nghịch đảo với nồng độ dư lượng Kanamycin trong mẫu.
REAGEN™Kanamycin ELISA Test Kit có khả năng cho 96 lần xác định hoặc kiểm tra 42 mẫu lặp lại (giả sử 12 giếng cho các tiêu chuẩn).Trả lại bất kỳ microwell không sử dụng nào vào túi giấy bạc và đóng lại chúng bằng chất hút ẩm được cung cấp trong gói ban đầu.Bảo quản bộ dụng cụ ở 2-8 ° C *.Thời hạn sử dụng là 12 tháng khi bộ sản phẩm được bảo quản đúng cách.
Nội dung lắp ráp | Số tiền | Lưu trữ |
Tấm phủ kanamycin | 1 x đĩa 96 giếng | 2-8 ° C |
Tiêu chuẩn Kanamycin Điều khiển âm (ống CAP trắng) 0,2 ng / mL (ống CAP màu vàng) 0,6 ng / mL (ống CAP màu cam) 1,8 ng / mL (ống nắp hồng) 5,4 ng / mL (ống nắp màu tím) 16,2 ng / mL (ống nắp xanh) 1000 ng / mL (đầu nhọn, tùy chọn, ống nắp đỏ) |
1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL |
2-8 ℃
|
Kanamycin Ab # 1 | 6.0mL | 2-8 ℃ |
HRP-Conjugated Ab # 2 | 6.0mL | |
10 × Chất pha loãng mẫu | 15 mL | |
Dung dịch rửa 20 × | 28mL | |
Dừng đệm | 12mL | |
Chất nền TMB | 12mL | |
10 × Mẫu Ext.đệm (tùy chọn) | 15mL | |
Bộ đệm cân bằng mẫu | 2 mL |
Nếu bạn không định sử dụng bộ này trong hơn 1 tháng, hãy bảo quản Kanamycin Standard Stock, Kanamycin Antibody # 1 và HRP-Conjugated Antibody # 2 ở -20 ° C hoặc trong tủ đông.
Loại mẫu | Giới hạn phát hiện (ng / g hoặc ppb) |
Cá / Tôm / Thịt / gan / thận | số 8 |
Tế bào Lysate | 2 |
Nước tiểu / huyết thanh | 5 |
Sữa | 2 |
Phân tích | Phản ứng chéo (%) |
Kanamycin | 100 |
Streptomycin | <0,1 |
Dihydrostreptomycin | <0,1 |
Neomycin | <0,1 |
Đầu đọc tấm microtiter (450 nm)
Máy trộn mô (ví dụ Omni Tissue Master Homogenizer)
Máy trộn Vortex (ví dụ máy trộn Genie Vortex từ VWR)
Pipet 10, 20, 100 và 1000 uL
Pipet đa kênh: 50-300 uL (Tùy chọn)
Đảm bảo các mẫu được lưu trữ đúng cách.Nói chung, các mẫu phải được bảo quản lạnh ở 2-4 ° C trong thời gian không quá 1-2 ngày.Làm đông mẫu đến tối thiểu -20 ° C nếu chúng cần được bảo quản trong thời gian dài hơn.Các mẫu đông lạnh có thể được rã đông ở nhiệt độ phòng (20 - 25 ° C / 68 - 77 ° F) hoặc trong tủ lạnh trước khi sử dụng.
Lấy 100 uL dịch lọc tế bào, thêm 900 uL dung dịch đệm 1 × Dịch pha loãng mẫu, trộn đều.
Ly tâm trong 5 phút ở 4000 x g.
Lấy 50 uL của phần nổi trên mỗi giếng để làm xét nghiệm.
Ghi chú: Hệ số pha loãng: 10.
Đối với 1,0 g mẫu đã đồng nhất, thêm 4,0mL của 1 × Phần chiết mẫu.đệm ,
Vortex mẫu trong 1 phút bằng máy trộn xoáy.
Ly tâm mẫu trong 5 phút ở 4.000 x g.
Cẩn thận chuyển 200uL của lớp trên cùng sang một ống mới, thêm 1.375mL dung dịch pha loãng mẫu 1X và 25uL dung dịch đệm cân bằng mẫu, xoáy trong 30 giây.
Sử dụng 50uL mỗi giếng để thử nghiệm.
Ghi chú: Hệ số pha loãng: 40.
Lấy 50uL mẫu nước tiểu hoặc huyết thanh, thêm 1,2 mL dung dịch pha loãng mẫu 1X, trộn đều.
Ly tâm trong 5 phút ở 4.000 x g.
Lấy 50uL phần nổi trên mỗi giếng để làm xét nghiệm.
Ghi chú: Hệ số pha loãng: 25.
Ghi chú: Hệ số pha loãng: 10
QUAN TRỌNG: Tất cả các thuốc thử phải được để ở nhiệt độ phòng trước khi sử dụng (1 - 2 giờ lúc 20 - 25°C / 68 - 77°F);Đảm bảo bạn đã đọc phần “Cảnh báo và Biện pháp phòng ngừa” trên trang 3. Các giải pháp nên được chuẩn bị ngay trước khi thử nghiệm ELISA.Tất cả các thuốc thử phải được trộn bằng cách đảo hoặc xoáy nhẹ trước khi sử dụng.Chuẩn bị thể tích cần thiết cho số lượng giếng đang chạy.Không để thuốc thử trở lại các ống / chai dự trữ ban đầu.Nên sử dụng các bể chứa dùng một lần khi xử lý thuốc thử có thể giảm thiểu nguy cơ nhiễm bẩn.
Trộn 1 thể tích Dung dịch rửa 20X với 19 thể tích nước cất.
Ghi nhãn các dải riêng lẻ sẽ được sử dụng và thay thế thuốc thử như ví dụ sau:
Thành phần | Khối lượng mỗi phản ứng | 24 phản ứng |
Kháng thể Kanamycin # 1 | 50uL | 1,2mL |
HRP-Conjugated Ab # 2 | 50uL | 1,2mL |
Giải pháp rửa 1X | 1,0 mL | 24mL |
Dừng đệm | 100 uL | 2,4 mL |
Chất nền TMB | 100 uL | 2,4 mL |
Thêm lần lượt 50 uL của mỗi Chất chuẩn Kanamycin vào các giếng khác nhau (Chỉ thêm các chất chuẩn vào đĩa theo thứ tự từ nồng độ thấp đến nồng độ cao).
Thêm lần lượt 50 uL của mỗi mẫu vào các giếng mẫu khác nhau.
Thêm 50 uL HRP-Liên hợp Ab # 2 vào mỗi giếng và 50 uL Kháng thể Kanamycin # 1 vào mỗi giếng.Trộn đều bằng cách lắc nhẹ đĩa bằng tay trong 30s.
Ủ đĩa trong 30 phút ở nhiệt độ phòng (20 - 25 ° C / 68 - 77 ° F).(Tránh ánh nắng trực tiếp và các áo ghế lạnh trong quá trình ủ.Nên đậy tấm microtiter trong khi ủ).
Rửa đĩa 4 lần với 250 uL dung dịch rửa 1X.Sau lần rửa cuối cùng, lật ngược đĩa và nhẹ nhàng thấm khô đĩa trên khăn giấy (Thực hiện bước tiếp theo ngay sau khi rửa đĩa. Không để đĩa khô trong không khí giữa các bước làm việc).
Thêm 100 uL chất nền TMB.Thời gian phản ứng ngay sau khi thêm chất nền.Trộn dung dịch bằng cách lắc nhẹ đĩa bằng tay trong 30 giây trong khi ủ (Không đặt bất kỳ chất nền nào trở lại thùng chứa ban đầu để tránh bất kỳ khả năng nhiễm bẩn nào.Bất kỳ dung dịch chất nền nào có màu đều là dấu hiệu của sự hư hỏng và cần được loại bỏ.Nên đậy tấm microtiter trong khi ủ).
Sau khi ủ 15 phút ở nhiệt độ phòng (20 - 25°C / 68 - 77°F), thêm 100 uL Stop Buffer để dừng phản ứng enzym.
Đọc đĩa càng sớm càng tốt sau khi bổ sung Stop Buffer trên đầu đọc đĩa có bước sóng 450 nm (Trước khi đọc, sử dụng khăn lau không có xơ ở đáy đĩa để đảm bảo không bị ẩm hoặc dấu vân tay cản trở kết quả đọc).
Đường chuẩn có thể được xây dựng bằng cách vẽ đồ thị độ hấp thụ tương đối trung bình (%) thu được từ mỗi chất chuẩn đối chiếu với nồng độ của nó tính bằng ng / mL trên đường cong logarit.
Độ hấp thụ tương đối (%) = độ hấp thụ không tiêu chuẩnhoặc mẫu x 100
Sử dụng các giá trị độ hấp thụ tương đối trung bình cho mỗi mẫu để xác định nồng độ tương ứng của thuốc được thử nghiệm tính bằng ng / mL từ đường chuẩn.
Hình dưới đây là đường chuẩn điển hình của cloramphenicol.
Liên lạc chúng tôi bất cứ lúc nào